本實驗觀察了大鼠胎腦組織在液氮中保存的細胞存活率,，并用保存的組織和新鮮組織做同種異體移植實驗,。液氮罐

　　一,、實驗方法

　　正常妊娠15～21天的SD大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉麻醉后,，在無菌條件下剖腹取胎,，切取所需胎腦組織,，制成1mm大小的組織塊,。用吸管將其移入含10%二甲基亞砜(DMSO)的無血清DMEM培養(yǎng)液中,，裝進凍存管，于4℃平衡1小時后置入-30℃冰箱,。約1小時后標本溫度降至-30℃(降溫速率為0.5℃～1.0℃/分),，然后放入液氮中保存。需要時，取出凍存管于37℃水浴中復溫,，冰塊熔化后再用Hank液以1∶1比例對凍存液反復稀釋4次,，每次3分鐘。此時即可用于檢測和移植,。細胞存活率檢測先采用胰酶消化制成細胞懸液,，用0.4%臺盼藍染色1分鐘，再按血球計數(shù)方法對死活細胞分別計數(shù),，求出細胞存活率,。腦內(nèi)組織移植分A、B兩組進行,，每組12只,，分別進行新鮮組織移植和保存組織移植。兩種組織均取自胎鼠頂葉,，前者離開母體時間不超過20分鐘,，后者在液氮中保存30天。采用左頂葉皮層切開移植,，每次植入3～5塊組織,。飼養(yǎng)6～8周后處殺，取腦,，連續(xù)石蠟切片,，進行HE、Nissl和嗜銀染色,。

　　二,、結(jié)果

　　細胞存活率觀察：不同部位組織在液氮中保存10天和30天，細胞存活率(%)大腦組織為67.78±4.46和65.14±4.55,，小腦組織為68.93±5.67,，腦干組織為71.07±7.43和69.63±1.99。經(jīng)方差分析,，三種組織之間細胞存活率差別不顯著(P>0.05),，不同保存時間之間細胞存活率差別也不顯著(P>0.05)。液氮罐

　　腦內(nèi)移植組織學觀察：A組移植物成活例數(shù)7/12,，移植物位于皮層下或伸入側(cè)腦室,，體積較大，周邊有薄層膠質(zhì)細胞反應帶,。移植物內(nèi)是均勻分布的大型神經(jīng)元和少量散在的膠質(zhì)細胞,。神經(jīng)元核大，染色淡,，核仁清楚,，并可見到雙核仁細胞,，胞漿中尼氏小體豐富。移植物內(nèi)有新生血管結(jié)構(gòu)及比較致密的神經(jīng)纖維網(wǎng),，在交界面上也有少量神經(jīng)纖維,。B組移植物成活例數(shù)2/10(2例感染不計)，移植物位于皮層下,，體積小,，呈散在的細胞團樣，神經(jīng)元核大淡染,，胞漿不豐富,。移植物內(nèi)也可見到血管內(nèi)皮細胞，嗜銀染色見移植物中神經(jīng)纖維稀少,。

　　三,、討論

　　本實驗考察了兩步法梯度降溫液氮保存胎腦組織的可能性。此法保存大鼠胎腦組織10天和30天平均細胞存活率在60%～70%,。將新鮮的和保存30天的組織植入同種大鼠腦內(nèi),，組織學檢查發(fā)現(xiàn)兩組都有移植物成活，但是與新鮮組織移植相比,，保存的組織移植后移植物體積小,，神經(jīng)元數(shù)量少，胞漿不豐富,，移植物內(nèi)神經(jīng)纖維少見,，表明神經(jīng)元分化較差。結(jié)果提示,，用兩步法梯度降溫液氮保存胎腦組織可取得較高的細胞存活率,，移植后也有一定的成活率，但是移植物成活質(zhì)量明顯不如新鮮組織移植,。所以,，這種保存方法能否實際應用還值得討論和進一步研究。液氮罐