乳雙歧桿菌U9是一株具有優(yōu)良益生功能的乳桿菌,。為了保證U9菌株活性,,為工業(yè)化益生菌制劑生產(chǎn)提供穩(wěn)定菌種,利用液氮深冷方式對U9菌株進行冷凍保藏,。以冷凍存活率為評價指標,,對冷凍保護劑種類進行篩選,并對保護劑配方進行正交試驗優(yōu)化。結(jié)果表明,,甘油,、海藻糖、脫脂乳粉及維生素C4種保護劑能對乳雙歧桿菌U9起到良好的保護作用;正交試驗優(yōu)化確定的保護劑配方為甘油2%,、海藻糖7.5%,、脫脂乳粉7.5%、維生素C 0.1%,,菌體冷凍后存活率達到94%,。
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乳雙歧桿菌是人體腸道中常見的益生菌,也是世界上被廣泛研究的益生菌菌種之一,,在維護人體健康中扮演重要角色,。據(jù)統(tǒng)計,有300多種科學出版物都對乳雙歧桿菌功能特性進行了描述,,其中130多種報道涉及其人體臨床研究,。大量報道表明,乳雙歧桿菌的保健作用已經(jīng)在許多胃腸健康和免疫功能臨床研究中得到了驗證,。目前,,人們已經(jīng)把乳雙歧桿菌制備成了發(fā)酵乳制品的直投發(fā)酵劑、膳食補充劑以及藥用制劑等,。
在乳雙歧桿菌工業(yè)化使用過程中,,菌種活力的保持與工業(yè)化生產(chǎn)緊密相關(guān)。傳統(tǒng)的保菌方式主要是采用真空冷凍干燥的方法,,但存在設(shè)備成本較高,、菌種存活率低等問題。
因此,,探究一種更為簡便的保菌方式顯得尤為重要。液氮深冷保菌方式因其實驗操作簡便,、成本較低,、菌種活力高等優(yōu)勢,越發(fā)廣泛地應用到菌種保藏中,。有研究采用3%甘油,、5%海藻糖、5%果糖,、8%脫脂乳,、0.05%維生素C、0.05%L-谷氨酸(L-GLU)作為保護劑配方,,對長雙歧桿菌起到良好保護作用,,保證在深冷條件下存活率接近100%。針對不同菌株研究特異性冷凍保護劑是菌株深冷保藏的關(guān)鍵,。
冷凍保護劑分為滲透型,、非滲透型,、半滲透型和抗氧化型4種,不同類型保護劑的保護機制也不同,。
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液氮深冷冷凍技術(shù),,能耗小,安全性高,,生產(chǎn)成本低,,能較好地提升菌種的存活率,為菌種的保藏提供了更有效便捷的方式,。冷凍保藏效果的關(guān)鍵在于冷凍保護劑的選擇,,通過對保護劑種類進行篩選,確定了甘油,、海藻糖,、脫脂乳粉和維生素C4種保護劑,它們能夠?qū)θ殡p歧桿菌U9在液氮中的冷凍保藏起到良好的保護作用,,并借助正交試驗及驗證試驗對保護劑濃度進行優(yōu)化,,確定保護劑配方為2%甘油、7.5%海藻糖,、7.5%脫脂乳粉,、0.1%維生素C。利用優(yōu)化后的保護劑配方對乳雙歧桿菌U9進行凍干保護,,存活率可達94%,,為乳雙歧桿菌U9在工業(yè)化生產(chǎn)中的應用提供理論依據(jù)。