關(guān)于動物細胞擴大培養(yǎng)的科研文獻分析
液氮罐
1.該實驗研究的目的或意義
利用動物細胞培養(yǎng)可以生產(chǎn)具有重要醫(yī)用價值的酶,、生長因子、疫苗和單抗等,，已成為醫(yī)藥生物高技術(shù)產(chǎn)業(yè)的重要部分,，利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)的生物制品已占世界生物高技術(shù)產(chǎn)品市場份額的50%，為了培養(yǎng)規(guī)模的進一步擴大,、優(yōu)化細胞培養(yǎng)環(huán)境,、提高產(chǎn)品的產(chǎn)出率與保證其質(zhì)量，動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)已成為各生產(chǎn)企業(yè)發(fā)展至關(guān)重要的環(huán)節(jié),。
2.為達到該目的采用的什么方法
根據(jù)動物細胞的類型和培養(yǎng)特性,，大規(guī)模培養(yǎng)可采用貼壁培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)和固定化培養(yǎng)等三種培養(yǎng)方法進行培養(yǎng),。
3.陳述該研究的結(jié)果
?、儋N壁培養(yǎng)：優(yōu)點：(1) 細胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養(yǎng)液,，清洗后直接加入新培養(yǎng)液,，容易更換培養(yǎng)液;
(2) 因細胞固定載體表面，不需過濾系統(tǒng)，容易采用灌注方式培養(yǎng),，從而達到提高細胞密度的目的;
(3) 當(dāng)細胞貼壁于生長基質(zhì)時,，細胞將更有效的表達一種產(chǎn)品;
(4) 同一設(shè)備可培養(yǎng)多種細胞，并根據(jù)需要采用不同的培養(yǎng)液和細胞的比例,。
缺點：(1) 細胞繁殖貼壁后不易消化下來,，培養(yǎng)的擴大比較困難;
(2) 培養(yǎng)設(shè)施占地面積大，設(shè)備投資大;
液氮罐
(3) 采用細胞反應(yīng)器培養(yǎng),，細胞無法進行顯微鏡觀察,，不能有效監(jiān)測細胞的生長狀態(tài);
(4) 在測定和控制細胞所處環(huán)境的完全均勻化方面比較困難。
?、趹腋∨囵B(yǎng)：優(yōu)點：(1) 操作簡單,、培養(yǎng)條件均一、便于進行定量研究;
(2) 傳質(zhì)和傳氧比較好,，有利于細胞與培基中的營養(yǎng)物質(zhì)和氣體充分接觸,，而且易于控制培養(yǎng)條件(溫度、pH,、氧分壓和CO2等);
(3) 它們在離體培養(yǎng)時不需要附著物,，只需懸浮于培養(yǎng)液中就可以良好生長;
(4) 懸浮培養(yǎng)法細胞增殖快，產(chǎn)量高,，設(shè)備結(jié)構(gòu)簡單;
(5) 細胞傳代時不需要再分散,，只需按比例稀釋即可繼續(xù)培養(yǎng)?？山梃b細菌發(fā)酵的經(jīng)驗,，容易擴大培養(yǎng)規(guī)模，可連續(xù)擴大生產(chǎn)量;
(6) 易于在連續(xù)密閉的系統(tǒng)中進行,，減少了操作步驟和污染的機會,。
③固定化培養(yǎng)：吸附法,、包埋法,、共價貼附法、微囊法,、離子/共價交聯(lián)法
4.該實驗的創(chuàng)新點及不足
該實驗的方法創(chuàng)新點在于方法較為全面,，優(yōu)缺點分明，不足之處在于方法比較通用,，沒有什么特別亮點的培養(yǎng)方法,。
5.你在改實驗基礎(chǔ)上繼續(xù)研究的設(shè)計思路
既然大規(guī)模培養(yǎng)了細胞，如何能保存細胞也是一個問題,，所以我想從保存細胞方面繼續(xù)設(shè)計研究,。大概的試驗方法如下：
①.挑選細胞：選擇生長旺盛期, 細胞界限清楚, 立體感強, 形態(tài)良好的細胞。
?、?消化細胞： 按細胞的常規(guī)消化方法用胰酶EDTA消化分散, 加入5~10ml.營養(yǎng)液(不含
血清), 以1000r/min,離心20分鐘,，棄上清。
?、?凍存懸液的制備： 將離心后沉淀的細胞收集起來, 加入適量凍存液, 輕輕吹打數(shù)次, 制成細胞懸液,。
?、?分裝封口： 將上述懸液分裝于安瓶內(nèi), 每支安靚裝1 毫升, 火焰封口, 貼好標(biāo)記, 裝入紗布袋中,。
⑤.梯度降溫： 將嚴(yán)密封口加注標(biāo)記的細胞安瓶置=4℃ 冰箱3~4小時, 然后放入氣態(tài)冷凍30分鐘,，使其降至-70℃以下,，再直接浸入液氮中凍存。
?、?復(fù)蘇培養(yǎng)：復(fù)蘇細胞時, 從液氮罐中取出安瓶, 迅速置入37~40℃水浴中, 并適當(dāng)搖勻, 使其在1分鐘內(nèi)融化完全,。在無菌條件下打開安瓶,將細胞懸液移入培養(yǎng)瓶中,1ml細胞懸液加20ml培養(yǎng)液, 然后放入37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng), 次日更培養(yǎng)1次。
?、?觀察結(jié)果：觀察復(fù)蘇培養(yǎng)的細胞的生民貼壁狀態(tài),、細胞生長繁殖速度和細胞傳代能力。如果細胞貼壁良好, 仍能繼續(xù)傳代下去, 其生長速度與凍前比較無明顯差異, 則可認(rèn)為凍存結(jié)果比較滿意,。
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