降溫程序是決定冷凍效果的另一個(gè)關(guān)鍵因素,。細(xì)胞內(nèi)部易形成冰晶對(duì)細(xì)胞造成損傷；若降溫速度過(guò)慢,，會(huì)因細(xì)胞外部介質(zhì)的水分結(jié)冰而導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度脫水死亡,。因?yàn)?60~0℃的低溫對(duì)細(xì)胞的損傷最大,，因此要選擇合適的降溫程序，讓細(xì)胞在能夠適應(yīng)溫度驟變的前提下,，迅速安全地通過(guò)這個(gè)溫度危險(xiǎn)區(qū),，提高冷凍效果。根據(jù)研究的數(shù)據(jù)和相關(guān)報(bào)道,，在精超低溫冷凍前先于4℃平衡15~25min,，再于距離液氮面15cm處停留5min，在距離液氮面5cm處停留10min,，可使櫛江珧,、近江牡蠣、馬氏珠母貝等精冷凍效果達(dá)到最好,。樣品體積對(duì)冷凍效果也有影響,。樣品體積的不同可能影響了熱的交換，體積小的樣品降溫快,，體積大的樣品降溫慢,，這間接造成了降溫條件的差異,，導(dǎo)致精活率不一樣。關(guān)于雙殼類最適冷凍體積的探討,，朱豪磊認(rèn)為香港牡蠣在冷凍體積為0.75mL時(shí)復(fù)蘇效率最高,；李純認(rèn)為紫貽貝、櫛孔扇貝和菲律賓蛤仔的最適精冷凍體積分別為0.4,、1和1mL,。有研究的數(shù)據(jù)顯示，櫛江珧和近江牡蠣精在冷凍體積為1.0~1.4mL的范圍內(nèi)保存效率最高,。分析以上研究結(jié)果不同的原因,，一方面是物種間的差異，更重要的是降溫程序存在差異,?？聛喎虻日J(rèn)為，不同體積的樣品保存時(shí)要對(duì)應(yīng)不同的降溫方法,，以達(dá)到最適保存效果,。1.0~1.4mL的樣品體積最適合櫛江珧和近江牡蠣的研究結(jié)果，雙殼類精的超低溫冷凍保存起始于20世紀(jì)70年代,。
氣相液氮罐 
