怎么樣利用液氮保藏菌種?
液氮罐
液超低溫保藏法是把菌種裝在含有冷凍保護劑的安瓶瓶內(nèi),，將該安瓶瓶放人液氮(-196℃)中保藏。由于菌絲體處于-196℃，其代謝降低到完全停止的狀態(tài),。
所以不需定期移植,。
液氮超低溫保藏法是菌種長期保藏的*有效*可靠的方法,。
具體操作如下：
(1)菌種制備 菌種在PDA培養(yǎng)基平板上于22-24℃下培養(yǎng)10-15天,，菌絲體充分生長后，用打孔器(直徑2-4毫米)切割瓊脂塊,，或用手術(shù)刀片把菌絲培養(yǎng)物切成2毫米X4毫米長方形小塊,。
(2)安瓶管制備 安瓶管的玻璃，要能經(jīng)受溫度突變而不破裂,，容易用火焰熔封管口,，恢復培養(yǎng)時容易打開。一般采用硼硅玻璃,，管的大小根據(jù)需要而定,，通常是75毫米X 10毫米或能容1.2毫升液體的安瓶瓶比較合適。
選好安瓶管后,，用印油書寫欲保藏的食用菌菌種的菌號于管壁上,，160℃干熱滅菌，使印記牢固地固定在管壁上,。
(3)保護劑 每管加進0.8毫升高壓滅菌的10%的甘油水溶液或10%二甲亞諷水溶液可作為冷凍保護劑,。
用無菌鑷子將這種帶有菌絲體的瓊脂塊移人加有保護劑的安瓶管中。用火焰將安瓶管上部熔封,，浸在水中檢查有無漏氣,。
(4)液氮保藏把已做好的安瓶菌種管放人具有孔洞的小塑料瓶中(在塑料瓶的底部放一塊鐵片，使塑料瓶連同安瓶管能一起沉人
液氮罐中),，蓋好瓶蓋,，在瓶蓋上連接一條細繩并作記號，以便提出所需的菌種,。把裝有安瓶管的塑料瓶吊在液氮罐口上,，使安瓶管緩慢地降溫，大約30分鐘后,，把安瓶管浸人液氮中進行長期保存,。
啟用
液氮罐中保存的菌種時，應(yīng)先將安瓶瓶置于35-40℃的溫水中,，使瓶內(nèi)的冰塊迅速融解,，然后在無菌條件下開啟安瓶瓶，用接種針取菌塊移接于適宜的培養(yǎng)基上,，置22-24℃活化培養(yǎng),。
