原生動(dòng)物的種類與數(shù)量很多,，分布極廣,，生活周期短，與人類關(guān)系極其密切,。反芻動(dòng)物瘤胃纖毛蟲類原生動(dòng)物占瘤胃微生物總量的50%以上并與許多瘤胃功能有關(guān),，如纖維素、淀粉,、蛋白質(zhì)的消化,。它們還可以降解植物和霉菌毒素，維持瘤胃內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,，清除消化道中某些病原菌,，增強(qiáng)動(dòng)物免疫力從而提高肉食品的安全性[2¨。液氮罐

瘤胃纖毛蟲原生動(dòng)物在體外很難培養(yǎng),，采用傳統(tǒng)傳代保種方法不僅浪費(fèi)人力物力而且菌種容易喪失活性甚至死亡,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性差[2引。超低溫保存為對(duì)纖毛蟲進(jìn)行體內(nèi)外消化、基因組和生物

技術(shù)研究提供了方便并且可以長期保持細(xì)胞活性,。

早期,，研究人員采用一步慢速冷凍法保存纖毛蟲成活率只有5%左右;后來人們對(duì)冷凍方法進(jìn)行改進(jìn)，形成兩步冷凍法,。**步慢速冷凍至保溫溫度,，使胞外水結(jié)冰;第二步保持恒溫使細(xì)胞充分脫水，然后將樣品直接投入到液氮中保存[2¨,。

細(xì)胞的超低溫保存活性與冷凍液,、保護(hù)劑的種類和濃度、保護(hù)劑與細(xì)胞混合時(shí)的平衡溫度和時(shí)間,、冷卻速度和解凍液等多個(gè)因素有關(guān),。使用甘油或二甲基亞砜作為保護(hù)劑，以25℃替代5℃作為平衡溫度,，纖毛蟲解凍后的活性增強(qiáng)[23J,。Nsabimana[2們研究發(fā)現(xiàn)不同種類纖毛蟲的**冷卻速度不同，J.prosto—ma,，D.rurninantium,，E.caudaturn，E.cauda—turn caudatum,，P.multivesiculatum和E.maggii的**冷卻速度分別是1.5,，1.7，1.5,，1.2,，1.6，2.3℃/min,。其它條件不變,，以瘤胃液作為凍融液可顯著提高纖毛蟲凍融存活率。液氮罐

遺憾的是,，至今還未見關(guān)于使用其它超低溫保存方法保存原生動(dòng)物的報(bào)道,。在超低溫保存研究中，簡單快速的檢測細(xì)胞活性的方法也是非常必要的,。

通過顯微鏡觀察菌運(yùn)動(dòng)性確定菌活性是原生動(dòng)物研究中常用的方法,，但這種方法存在兩個(gè)不足：一是把不運(yùn)動(dòng)的活細(xì)胞誤認(rèn)為是死細(xì)胞而導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確，二是外部環(huán)境影響細(xì)胞運(yùn)動(dòng),，為觀察帶來不便,。雙重?zé)晒馊旧ǖ淖儺愊禂?shù)低，其結(jié)果的準(zhǔn)確性更高,，可作為一個(gè)快速測定原蟲細(xì)胞損傷程度的工具[2捫,。