液氮研磨如何操作?先了解一下液氮研磨原理吧!
液氮容器的準備
液氮一般保存于
液氮罐中,。實驗前先準備一個保溫桶,，將適量液氮轉(zhuǎn)移至保溫桶中,，同時還要準備一個不銹鋼或塑料湯勺，湯勺的柄不夠長時要想辦法加長,，以免凍傷手,。
組織的處理及用量
任何組織在獲得后如不立即使用，要盡快保存在低溫環(huán)境中(一196℃液氮中速凍,，一70℃保存),。使用時，植物組織應(yīng)當先用自來水清洗外表的泥沙,，用單蒸水沖洗兩遍,，用75%乙醇浸洗約30秒，再用滅菌雙蒸水沖洗兩遍,，用無菌濾紙吸干,，然后根據(jù)需要取適當部位的組織。動物組織不必清洗,，但要盡量剔除周邊的組織及血塊,。組織的取量要比實際需要量大1一2倍,，因為研磨時部分組織會粘在研缽和研棒上,，會致部分組織樣本丟失。
研缽的固定
我們在實驗時發(fā)現(xiàn),，研缽在加液氮后溫度很低,，外表會形成許多冰晶，用力研磨組織時易打滑，研缽內(nèi)的組織液氮混合物很容易濺出,，造成組織丟失,，也容易凍傷手。如果在研缽下墊些紗布或濾紙,，雖不易滑動,，但由于緩沖作用，研磨時不受力,，不足取,。后來我們作了如下改進:一是做個木支架，即選一塊厚約兩寸的木板,，在上面挖個半球形圓洞(大小根據(jù)研缽大小而定),，木板兩端留一定長度以備手握之用，使用時將研缽卡在半球形洞中,，既穩(wěn)當又不會凍傷手;二是備一條干凈的毛巾或紗布(干的),，折成長條形，將研缽包圍起來,，兩端合并后用手抓住,，這個方法簡單實用，但要特別小心,，以免凍傷,。
液氮罐
研磨方法
空缽先用液氮預(yù)冷，再將研棒的上端用紗布包裹(用力時手不會痛),，組織**切成薄片,，研磨時不易濺出，也更容易磨碎,，研棒**頂著手心,，這樣便于用力。研磨過程中要避免液氮干涸,，研磨至細粉即可,。待液氮剛蒸發(fā)完時，用一個小藥勺取出所需用量進行下一步實驗,，或者將組織粉末裝人容器內(nèi),，保存于一70℃的溫度下，以備下一步實驗用,。使用得當?shù)囊旱心ソM織法,，將為下一步實驗成功奠定了基礎(chǔ)。值得一提的是,，操作中所有接觸的器皿及耗材須清洗干凈并消毒,。如果研磨組織用于提取RNA時,，使用的器皿及耗材必須采用焦碳酸二乙醋(DEPC)滅活RNase并進行高壓消毒處理。
