細(xì)胞復(fù)蘇的原則-快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化,，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害,。
氣相液氮罐
一,、 實驗前準(zhǔn)備：
1、將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2,、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面,。
3、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等。
二,、取出凍存管：
1,、根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。
2,、從液氮罐中取出細(xì)胞盒,，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號,。
三,、迅速解凍：
1、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動,，使管中的液體迅速融化。
2,、約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解,，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi),。
四,、平衡離心：
用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五,、制備細(xì)胞懸液：
1,、吸棄上清液,。
2、向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,，吹打制成細(xì)胞懸液,。
六、細(xì)胞計數(shù)：
細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜,。
七,、培養(yǎng)細(xì)胞：
將復(fù)合細(xì)胞計數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),，換液的時間由細(xì)胞情況而定,。
初學(xué)者易犯錯誤：
1、水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃,。
2,、水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導(dǎo)致傳熱不佳,，使融化時間延長,。
3,、離心前忘記平衡,，導(dǎo)致離心機損壞和細(xì)胞丟失。
氣相液氮罐
4,、一次復(fù)蘇細(xì)胞過多,，忘記更換吸頭和吸管，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染,。
