細胞復蘇的原則-快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,，對細胞造成損害,。
氣相液氮罐
一,、 實驗前準備：
1,、將水浴鍋預熱至37℃
2,、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面,。
3,、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管,、培養(yǎng)瓶等等,。
二、取出凍存管：
1,、根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號,。
2、從液氮罐中取出細胞盒,，取出所需的細胞,，同時核對管外的編號。
三,、迅速解凍：
1,、迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動,，使管中的液體迅速融化,。
2、約1-2min后凍存管內液體完全溶解,，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內。
四,、平衡離心：
用架盤天平平衡后,，放入離心機中3000r/min 離心3min
五、制備細胞懸液：
1、吸棄上清液,。
2,、向離心管內加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細胞懸液,。
六,、細胞計數(shù)：
細胞濃度以5×105/ml為宜。
七,、培養(yǎng)細胞：
將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內,，將培養(yǎng)瓶放入37℃5%CO2的培養(yǎng)箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定,。
初學者易犯錯誤：
1,、水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
2,、水浴鍋內凍存管太多,，導致傳熱不佳，使融化時間延長,。
3,、離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失,。
氣相液氮罐
4,、一次復蘇細胞過多，忘記更換吸頭和吸管,，導致細胞交叉污染,。
