目的：液氮保存對瓣膜細(xì)胞活性及組織結(jié)構(gòu)影響,，為**限度地保存瓣的生物活性和組織結(jié)構(gòu)完整性提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),。
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方法：本實(shí)驗(yàn)以6只豬的主動脈瓣和肺動脈瓣為研究對象,。每個瓣葉被分成2份，每只動脈瓣提供6個瓣葉片,，隨機(jī)分到6個主動脈瓣或肺動脈瓣組,，每組6個瓣葉片(n=6)。6個肺動脈瓣組在含不同抗生素的DMEM液中,，于不同溫度下浸泡6h或24h,。6個主動脈瓣組經(jīng)抗菌處理，并用速度控制降溫容器或-20℃和-80℃的低溫冰箱梯度降溫后,，在液氮中冷凍保存1,、3月。應(yīng)用XTT比色法測定瓣膜細(xì)胞活性,，并結(jié)合光鏡,、透射電鏡。
結(jié)果：液氮保存后瓣膜細(xì)胞活性明顯下降(P<0.05),，內(nèi)皮細(xì)胞脫落,，成纖維細(xì)胞不可逆變性增加,，細(xì)胞外基質(zhì)纖維連接蛋白與硫酸軟骨素不同程度流失,，間質(zhì)膠原纖維排列紊亂，但膠原橫紋結(jié)構(gòu)仍較清晰,。冷凍保存1月與3月,，結(jié)果無顯著性差異。速度控制降溫容器組的瓣膜細(xì)胞活性和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),、細(xì)胞外基質(zhì)的完整性均好于-20℃和-80℃的低溫冰箱中各過度2小時降溫組,。再次冷凍保存后，瓣膜活性和組織結(jié)構(gòu)損害進(jìn)一步加重,，在保存液中加青,、鏈霉素對瓣膜活性和組織結(jié)構(gòu)無明顯影響。
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結(jié)論：液氮冷凍保存將損害瓣膜的細(xì)胞活性和組織結(jié)構(gòu)完整性,，但在冷凍時間<3月時,，損害的程度與凍存時間無明顯關(guān)系;速度控制降溫容器可用于同種瓣冷凍保存的梯度降溫。冷凍保存的同種瓣一經(jīng)解凍融化,，不宜再次冷凍保存后使用;在保存液中加入青,、鏈霉素并不加重瓣膜的損害。
