以過濾海水（水溫15℃,、pH8.1,、鹽度27%）為激活液（下同）,，精液與激活液混合后在顯微鏡下觀察精子活力（激活率,、活動時間和壽命）,。激活率為給定視野中被激活精子的數(shù)量占全部精子數(shù)量的百分比,；運動時間是指精子自激活開始至90%的精子原地顫動為止所經(jīng)歷的時間,；精子的壽命指精子從激活開始至90%的精子停止運動的時間,。實驗重復3次,。液氮罐
稀釋液種類對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗分別以HBSS、MPRS,、Cortland液為稀釋液（如表一）,，以10%EG為抗凍劑（抗凍劑為終濃度，下同）配制抗凍液,；將精液與抗凍液按1︰3比例混勻,，4℃平衡30min；將平衡后的精液-抗凍液混合物分裝入0.25mL麥細管中,，然后用兩步降溫法（即將盛精麥細管平放在自制簡易降溫裝置的液氮面上7.5cm處,，停留10min后投入液氮中）保存。12h后,，將麥細管從液氮中快速取出,，于40℃水浴中溶化后檢測精子激活率。
稀釋比例對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗以10%EG為抗凍劑,、Cortland液為稀釋液配制抗凍液,，將精液與抗凍液按1：1、1：2,、1：3,、1：4、1：5,、1：7,、1：9混勻，按前文方法冷凍保存精子及解凍與激活率檢測,。
抗凍劑種類及濃度對精子超低溫冷凍保存效果的影響試驗以5%,、10%、15%及20%四個濃度的DMSO,、Gly,、EG、PG為抗凍劑、Cortland液為稀釋液配制抗凍液,，將精液與抗凍液按1︰3混勻,，然后冷凍保存精子及解凍與活力檢測。液氮罐
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