細(xì)胞凍存——保存細(xì)胞的主要方法
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細(xì)胞凍存是將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,，這樣可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái),，以便需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),。而且適度地保存一定量的細(xì)胞,，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件丟失細(xì)胞,，起到了細(xì)胞保種的作用。
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原理是慢凍快融，利用這一原理可以**限度的保存細(xì)胞活力,。
凍存的原理——慢凍：主要是防止細(xì)胞在冷凍過(guò)程中形成冰晶，對(duì)細(xì)胞造成損害;
復(fù)蘇細(xì)胞的原理——快融：主要是防止DMSO在液體狀態(tài)下對(duì)細(xì)胞的毒害作用,，快速使細(xì)胞進(jìn)入復(fù)蘇和生長(zhǎng)狀態(tài);
當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下,，細(xì)胞器脫水，細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,，并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶,。如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞逐步脫水,，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,，結(jié)晶就大，大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜,、細(xì)胞器的損傷和破裂,。復(fù)蘇過(guò)程應(yīng)快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶,，即冰晶的重結(jié)晶,。
注意事項(xiàng)：
1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,，但**為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。在凍存前一天**換一次培養(yǎng)液;
2,、將凍存管放入液氮灌或從中取出時(shí),，要做好防護(hù)工作，以免凍傷;
3,、凍存和復(fù)蘇**用新配制的培養(yǎng)液,。
4、取細(xì)胞的過(guò)程中注意帶好防凍手套,，護(hù)目鏡,。此項(xiàng)特別重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,，可導(dǎo)致爆炸。
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