注意事項:
液氮罐
1、注意無菌操作
2,、細胞復蘇時融化凍存細胞速度要快,,防止細胞損傷,,細胞復蘇后的操作**在適宜溫度中進行,,減少冷凍保護劑對細胞的毒性,。
3,、為了避免復蘇過程中細胞液中有冰晶的出現(xiàn),,破壞細胞膜及細胞內部結構。從液氮拿出來,,要快速丟入37度水浴,,等細胞液剛剛化完取出,加培養(yǎng)液稀釋,。
4,、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動,使其受熱均勻,,并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞,。打開細胞凍存管之前要用酒精棉球將凍存管消毒并晾干。
5,、液氮一定的危險性,打開液氮罐取出細胞時,,要注意防凍,,戴防凍手套,防護眼睛,。
6,、如果凍存管密封不嚴,液氮可被吸入,。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,,將可能發(fā)生爆炸。復蘇過程中應蓋上恒溫水浴鍋的蓋,。
細胞復蘇后貼壁細胞較少的原因:
1、凍存細胞時消化時間過長,,導致細胞復蘇時失去鐵壁能力,。
2、細胞凍存液的質量不好也會導致細胞死亡,。
3,、凍存液的量加的太多也不好。
液氮罐
4,、凍存的時候把DMSO混均勻,,會有一些影響,,但不會太大,。