PBMNC分離效果
按照GMP生產(chǎn)規(guī)范和臨床ACI要求分離外周血PBMNC,，冷凍保存前細(xì)胞活性為99.6%±0.4%（n=5），與原始血樣比，PBMNC回收率58.4%±6.52%（n=5）,。
自增壓液氮罐
細(xì)菌和真菌培養(yǎng)陰性，實現(xiàn)全程無菌處理,。
不同冷凍保護(hù)液對PBMNC的保護(hù)效果不同
PBMNC在－196℃液氮中儲存24個月后復(fù)蘇,，鏡下觀察見細(xì)胞形態(tài)完整，圓形飽滿,，PBMNC復(fù)蘇效率89.7%±3.82%,，凍存液中含80%無血清培養(yǎng)基組和含80%自體血漿組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異（P≥0.05）（表1）,。
PBMNC凍存后誘導(dǎo)
AIL細(xì)胞的體外增殖及表型分析在倒置顯微鏡下觀察顯示,，外周血單個核細(xì)胞呈懸浮生長，大小均勻,，折光性一致,，AIL經(jīng)4d培養(yǎng)后部分細(xì)胞明顯增大，可見細(xì)胞集落,，胞核密度加強(qiáng),，體積增大，胞膜光滑,，未見突起,，新鮮與凍存后的單個核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL在形態(tài)和表型上無明顯差別，增殖高峰期均在10－12d,。
在培養(yǎng)過程中第14天,，凍存組AIL細(xì)胞所占相對百分率由約2.3%上升約為10.4%，細(xì)胞數(shù)增加約1048倍,，對照組AIL所占相對百分率由約2.3%上升為約11.3%,，細(xì)胞數(shù)增加約1105倍。兩組之間在細(xì)胞增長倍數(shù)與AIL所占百分比無顯著差異（P＞0.05）,。
（表1）
效應(yīng)細(xì)胞的體外細(xì)胞毒活性
新鮮的與凍存的單個核細(xì)胞誘導(dǎo)的AIL對NK敏感（K562）或非敏感株細(xì)胞（HeLa）及貼壁或懸浮生長的腫瘤細(xì)胞均顯示出很強(qiáng)的殺傷活性,，且該活性隨效靶濃度比的增加而增大，兩組間的細(xì)胞毒活性無顯著性差異（P＞0.05）（表2）。
自增壓液氮罐
圖2：比較各種冷凍和對照組之間的增殖和細(xì)胞表型,。A：所有表型培養(yǎng)前,。B：所有在冷凍組表型培養(yǎng)14 天后。C：所有對照組表型培養(yǎng)14 天后,，D：所有增殖,。E：自體免疫淋巴細(xì)胞。
