1.不同抗凍劑對(duì)櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

用不同濃度的DMSO和甘油作為保護(hù)劑冷凍精子，解凍激活后檢測(cè)精子活率,。其中,，櫛江珧冷凍后直接鏡檢精子活率最高的是8%DMSO處理組，為60.2%,；曙紅Y染色結(jié)果與鏡檢結(jié)果相吻合，即8%DMSO處理組精子活率最高,，為55.6%(圖1A),。而近江牡蠣冷凍后鏡檢精子活率最高的是10%DMSO處理組(66.0%)；曙紅Y染色結(jié)果亦顯示10%DMSO保護(hù)效果**,，為60.9%(圖1B),。

2.不同降溫程序?qū)苯蚝徒迪牼颖４嫘Ч挠绊?nbsp; 自增壓液氮罐

用終濃度8%和10%的DMSO分別作為櫛江珧和近江牡蠣的保護(hù)劑,，檢測(cè)A、B,、C,、D4種不同的降溫程序的保護(hù)效果。如圖2所示,，降溫程序A對(duì)精子的保護(hù)效果較差,，櫛江珧和牡蠣的精子活率分別為26.1%和32.8%(直接鏡檢)；采用降溫程序B處理,，櫛江珧和牡蠣精子的活率明顯上升至46.5%和55.6%(直接鏡檢),；按照降溫程序C進(jìn)行降溫后精子的活率最高,，櫛江珧達(dá)到60.2%(直接鏡檢)和55.6%(曙紅Y染色),，牡蠣達(dá)到66.0%(直接鏡檢)或60.9%(曙紅Y染色)；而降溫程序D,，即直接津入液氮法的保護(hù)效果最差,，精子活率接近0。

3.精液稀釋方式不同對(duì)櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

DMSO對(duì)精子存在一定的毒性,，DMSO濃度過(guò)高或者作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)都會(huì)增加對(duì)精子的損傷,。DMSO分子滲透進(jìn)入精子的時(shí)間約為30min，在這段時(shí)間內(nèi)采取逐級(jí)升高DMSO濃度的方式稀釋精液,，以減少DMSO的毒性,。結(jié)果見圖3,，將抗凍液等分為3份,，依次與精子混合的稀釋方案對(duì)精子的保護(hù)效果**,，櫛江珧鏡檢和曙紅Y染色的精子活率分別達(dá)到了63.0%和60.9%，近江牡蠣鏡檢和曙紅Y染色的精子活率分別達(dá)到了66.1%和61.8%,。

4.不同平衡時(shí)間對(duì)櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

檢測(cè)不同平衡時(shí)間對(duì)冷凍效果的影響,，如圖4所示，櫛江珧和近江牡蠣精液在不經(jīng)4℃平衡時(shí)保存效果都最差,，櫛江珧精子鏡檢和曙紅Y染色檢測(cè)活率分別為39.0%和34.5%，近江牡蠣為42.0%和36.7%,。櫛江珧在平衡時(shí)間為15min時(shí)保存效果**,，鏡檢和曙紅Y染色檢測(cè)活率分別為60.5%和54.9%，近江牡蠣在平衡時(shí)間為20min時(shí)保存效果**,，鏡檢和曙紅Y染色檢測(cè)活率分別為64.5%和60.0%,。利用SPSS軟件中的單因素方差法(analy-sisofvariance,ANOVA)分析發(fā)現(xiàn)，櫛江珧和近江牡蠣平衡15,、20和25min的3個(gè)樣本復(fù)蘇后精子活率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，因此4℃平衡15~25min都有利于精子的冷凍保存,。

5.不同樣品體積對(duì)櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果的影響

不同保存體積對(duì)冷凍效果存在明顯的影響,，如圖5所示。當(dāng)樣品體積為0.2mL時(shí),，櫛江珧和近江牡蠣精子保存效果都是最差的,，低至27.8%和31.7%(鏡檢)。櫛江珧精子活率最高的是1mL體積組,，鏡檢和曙紅Y染色分別為60.0%和53.5%,；近江牡蠣精子活率最高的也是1mL體積組，鏡檢和曙紅Y染色分別為63.0%和57.1%,。1.4mL體積組櫛江珧和近江牡蠣精子的活率也較高,，直接鏡檢櫛江珧和近江牡蠣精子活率約為56.3%和60.5%，且與1.0mL體積組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05),。

6.不同保存時(shí)間對(duì)櫛江珧和近江牡蠣精子復(fù)蘇效果的影響 自增壓液氮罐

對(duì)同一批樣品,，分別在冷凍不同天數(shù)后解凍復(fù)蘇統(tǒng)計(jì)精子活率。如圖6所示,，冷凍精子與鮮精凍0d)相比精子活率明顯降低,，從90%降至60%左右,。其中冷凍0.5,、1、7和30d組樣品間精子活率并無(wú)顯著差異(P＞0.05),；冷凍180d樣品組的精子活率略低于0.5、1,、7和30d組樣品(P＜0.05),。