很多時候,，我們需要把細胞冷凍起來，以便于長期保存,，以備不時之需,。而復(fù)蘇,，就是使冷凍的細胞蘇醒過來，恢復(fù)活力,。液氮罐廠家

其實,，細胞凍存和復(fù)蘇的protocol教科書和實驗手冊上面都有。毛博我不想再重復(fù)了,。這里,，毛博根據(jù)自己做細胞培養(yǎng)近10年的經(jīng)驗和體會，談?wù)剳?yīng)該注意的一些事項和技巧,，大部分都是血淚教訓(xùn)和經(jīng)驗總結(jié),。都是干貨喲。

1冷凍越慢越好,，復(fù)蘇越快越好

高大上的實驗室可以使用程序冷凍儀,。一切由機器代勞,。屌絲實驗室就只好用人肉程序冷凍儀。具體的protocol,，到處都有,。毛博想提醒大家的是，細胞冷凍越慢越好,，寧慢勿快,。做細胞冷凍前，事先留出充足的時間,。

而復(fù)蘇速度越快越好,。從液氮罐里取出來之后，迅速放在37°C水浴中,，然后使勁搖呀搖,。令其盡快融化。

2高高興興上班,，平平安安回家

細胞凍存和復(fù)蘇是細胞培養(yǎng)技術(shù)里面最容易出事的部分,。凡是和液氮接觸的操作，注意戴保護眼鏡和手套,。最需要小心的是：復(fù)蘇的時候,，在水浴中搖呀搖的時候。有時候小瓶會爆炸的,。所以,，一定要戴保護眼鏡和手套。不多說了,，說多了滿眼都是淚,。還有，凍存液中的DMSO是有毒致癌的,。接觸的時候一定一定要帶好手套,。

3凍存細胞數(shù)量要足夠

無論再怎么小心，細胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會死掉一批的,。所以,，一開始凍存細胞的數(shù)量要足夠。一般最低要達到5×106/毫升,，一瓶不夠兩瓶湊,。但是，這個不能一概而論,。有些細胞,，比如雜交瘤細胞，只需要1-3x106/毫升。液氮罐廠家

4做好標(biāo)記

把培養(yǎng)瓶放入提手,，末端應(yīng)該扎有小牌,，注明主人的名字，細胞名稱和凍存日期,。還要在每個凍存管上寫上細胞名稱,，代數(shù)和凍存日期。

實驗室的液氮罐都是公用的,。每個人應(yīng)該有屬于自己的提手,。毛博當(dāng)年就發(fā)生過為了找自己的細胞，被迫把整個液氮罐翻了個底朝天的慘劇,。

 

5細心呵護

剛剛復(fù)蘇的細胞就象剛剛出生的baby,，非常脆弱。需要我們的細心呵護,。培養(yǎng)液要事先在培養(yǎng)箱或者水浴中復(fù)溫,。一切的和細胞接觸的動作都要輕柔。把細胞從凍存管里吸出來,，注入離心管,，要輕輕地吸取和滴加。包括給離心管補加培養(yǎng)液的時候,，都要輕輕地滴加,。離心要用低速離心(500-1000轉(zhuǎn)/分鐘),。吹打要用專用的吹打管,，而不要圖方便用移液槍，吹打也要輕輕的,。

6DMSO的問題

上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì),。那么，解凍之后,，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢?答案是no,。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細胞外，99%的細胞都不需要去除DMSO,。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的,。液氮罐廠家

7物離鄉(xiāng)貴，人離鄉(xiāng)賤

解凍后的細胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清,。因為每一種細胞都有自己特定的,，并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清,，會造成細胞生長不良,，甚至死亡。這和一個人突然離家千里，會水土不服是一樣的道理,。

細胞培養(yǎng)是個苦活,，根本離不開人。毛博還記得當(dāng)年當(dāng)實驗狗的時候,，放個長假都要惦記著培養(yǎng)箱里面的細胞是不是該換液了,。而掌握了有效的凍存和復(fù)蘇的技術(shù)，就可以解決這個問題,。春節(jié)回家前把細胞都凍上,，過了年回來再開干。