很多時候,，我們需要把細(xì)胞冷凍起來，以便于長期保存,，以備不時之需,。而復(fù)蘇，就是使冷凍的細(xì)胞蘇醒過來,，恢復(fù)活力,。液氮罐廠家

其實，細(xì)胞凍存和復(fù)蘇的protocol教科書和實驗手冊上面都有。毛博我不想再重復(fù)了,。這里,，毛博根據(jù)自己做細(xì)胞培養(yǎng)近10年的經(jīng)驗和體會，談?wù)剳?yīng)該注意的一些事項和技巧,，大部分都是血淚教訓(xùn)和經(jīng)驗總結(jié),。都是干貨喲。

1冷凍越慢越好,，復(fù)蘇越快越好

高大上的實驗室可以使用程序冷凍儀,。一切由機(jī)器代勞。屌絲實驗室就只好用人肉程序冷凍儀,。具體的protocol,，到處都有。毛博想提醒大家的是,，細(xì)胞冷凍越慢越好,，寧慢勿快。做細(xì)胞冷凍前,，事先留出充足的時間,。

而復(fù)蘇速度越快越好。從液氮罐里取出來之后,，迅速放在37°C水浴中，然后使勁搖呀搖,。令其盡快融化,。

2高高興興上班，平平安安回家

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇是細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)里面最容易出事的部分,。凡是和液氮接觸的操作,，注意戴保護(hù)眼鏡和手套。最需要小心的是：復(fù)蘇的時候,，在水浴中搖呀搖的時候,。有時候小瓶會爆炸的。所以,，一定要戴保護(hù)眼鏡和手套,。不多說了，說多了滿眼都是淚,。還有,，凍存液中的DMSO是有毒致癌的。接觸的時候一定一定要帶好手套,。

3凍存細(xì)胞數(shù)量要足夠

無論再怎么小心,，細(xì)胞在冷凍和復(fù)蘇過程中總會死掉一批的。所以,，一開始凍存細(xì)胞的數(shù)量要足夠,。一般最低要達(dá)到5×106/毫升,，一瓶不夠兩瓶湊。但是,，這個不能一概而論,。有些細(xì)胞，比如雜交瘤細(xì)胞,，只需要1-3x106/毫升,。液氮罐廠家

4做好標(biāo)記

把培養(yǎng)瓶放入提手，末端應(yīng)該扎有小牌,，注明主人的名字,，細(xì)胞名稱和凍存日期。還要在每個凍存管上寫上細(xì)胞名稱,，代數(shù)和凍存日期,。

實驗室的液氮罐都是公用的。每個人應(yīng)該有屬于自己的提手,。毛博當(dāng)年就發(fā)生過為了找自己的細(xì)胞,，被迫把整個液氮罐翻了個底朝天的慘劇。

 

5細(xì)心呵護(hù)

剛剛復(fù)蘇的細(xì)胞就象剛剛出生的baby,，非常脆弱,。需要我們的細(xì)心呵護(hù)。培養(yǎng)液要事先在培養(yǎng)箱或者水浴中復(fù)溫,。一切的和細(xì)胞接觸的動作都要輕柔,。把細(xì)胞從凍存管里吸出來，注入離心管,，要輕輕地吸取和滴加,。包括給離心管補加培養(yǎng)液的時候，都要輕輕地滴加,。離心要用低速離心(500-1000轉(zhuǎn)/分鐘),。吹打要用專用的吹打管，而不要圖方便用移液槍,，吹打也要輕輕的,。

6DMSO的問題

上面提到了DMSO是一種有毒致癌物質(zhì)。那么,，解凍之后,，應(yīng)不應(yīng)該去除凍存液中的DMSO呢?答案是no。除了極少數(shù)特別注明的對DMSO敏感的細(xì)胞外,，99%的細(xì)胞都不需要去除DMSO,。解凍后的頻繁換液會慢慢去除掉DMSO的。液氮罐廠家

7物離鄉(xiāng)貴，人離鄉(xiāng)賤

解凍后的細(xì)胞要用和以前一樣的培養(yǎng)液和血清,。因為每一種細(xì)胞都有自己特定的,，并且已經(jīng)熟悉了的生長環(huán)境。突然使用不一樣的培養(yǎng)液和血清,，會造成細(xì)胞生長不良,，甚至死亡。這和一個人突然離家千里,，會水土不服是一樣的道理,。

細(xì)胞培養(yǎng)是個苦活，根本離不開人,。毛博還記得當(dāng)年當(dāng)實驗狗的時候,，放個長假都要惦記著培養(yǎng)箱里面的細(xì)胞是不是該換液了。而掌握了有效的凍存和復(fù)蘇的技術(shù),，就可以解決這個問題,。春節(jié)回家前把細(xì)胞都凍上，過了年回來再開干,。